Нашли опечатку? Выделите ее мышкой и нажмите Ctrl+Enter
Название: In Vitro Transcription and Translation
Автор: Tymms M.
Аннотация:
Клетки, на фундаментальном уровне, протеин-продакшн. Поэтому, естественно, когда исследователи должны сделать определенный белок, они должны позволить клеткам делать работу за них. Но живые клетки не очень хороши на делать экзогенных белков; некоторые белки являются токсичными, а другие деградируют или просто слипаются в нерастворимые агрегаты называются тела включения.
В эти дни, ученые иногда принимают минималистский подход, выкинув в клетки и ее загрязняющих компонентов в целом и сохраняя только то, что им нужно для транскрипции и трансляции. Такое экстракорпоральное экстракты позволяют производить белок из линейной или кольцевой ДНК, в количествах, достаточно больших, чтобы очистить и анализировать. Эту тактику также обеспечивает способ включения модифицированных аминокислот в белке, не отравляя клетки, или выразить мутировавшего Гена товаров без длительных этапов клонирования.1 Но есть и минусы тоже. Большинство систем в лабораторных условиях производят намного меньше белка, чем в системах vivo, и в некоторых случаях белки, произведенные в лабораторных условиях отсутствия нормальной биологической активностью.
В начале транскрипции/перевода систем, работающих отдельно транскрипцией и переводом реакции и многие компании по-прежнему предлагают эту опцию (см. таблицу).1 более поздние версии соединил два шага в одну трубу, с протоколами, которые сведены к минимуму шагов пипетирования для защиты РНК от деградации. Процедуру требуется где-то от 90 минут индивидуальные реакции на 24 часа для производства масштабных усилий.